Богатият на лутеолин екстракт от цветя на хризантема потиска изходната серумна пикочна киселина при японски субекти

Богатият на лутеолин екстракт от цветя на хризантема потиска изходната серумна пикочна киселина при японски пациенти с лека хиперурикемия

Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd., 1 Numata, Kitagata-cho, Ichinomiya, Aichi, 493-8001, Япония

Резюме

Заден план: Лутеолинът е флавоноид, открит в различни ядливи растения, който показва различни ползи за здравето, включително противовъзпалителни и подагра ефекти. Въпреки това, има малко клинични изследвания на лутеолин от гледна точка на превенцията на подагра. Проведохме клинично изпитване на добавки с екстракт от цветя на хризантема, богат на лутеолин (LCE), за да оценим ефекта върху нивата на серумната пикочна киселина при японски мъже.

Методи: Изследвахме ефекта на LCE, съдържащ 10% лутеолин в две двойно-сляпи плацебо-контролирани проучвания. В проучването с единична доза субектите на гладно са приемали капсула, съдържаща 100 mg LCE (10 mg лутеолин) или плацебо преди поглъщане на тестово хранене с високо съдържание на пурини и нивото на серумната пикочна киселина се определя с течение на времето. За проучването с многократно приложение субектите са приемали плацебо или LCE капсула в продължение на 4 седмици. Серумната пикочна киселина на гладно се оценява преди и след поглъщане.

Резултати: Пероралният прием на LCE няма значително влияние върху серумната пикочна киселина. След 4 седмици LCE поглъщане, серумната пикочна киселина има тенденция да намалява в групата на LCE. След прием на LCE при пациенти с изходно ниво на пикочна киселина от 5,5 до 7,0 mg/dL се наблюдава значително намаляване на серумната пикочна киселина. Няма аномалии, предполагащи неблагоприятни ефекти по време или след поглъщане на LCE.

Заключение: Поглъщането на LCE в продължение на 4 седмици намалява нивото на пикочната киселина в серума. Лутеолинът може да предотврати подагра, като контролира пикочната киселина.

Ключови думи

лутеолин, хризантема, подагра, пикочна киселина, пуринова основа

Съкращения

XOD: ксантиноксидаза; LCE: богат на лутеолин екстракт от цветя на хризантема; CRP: С-реактивен протеин; AUC: площ под кривата на концентрацията спрямо времето; CFO: масло от цветя на хризантема

Фонове

Подаграта е нарушение, при което се натрупват иглевидни кристали на пикочна киселина в периферните тъкани поради хиперурикемия [1]. За потискане на острата болка и възпаление се предписват нестероидни противовъзпалителни лекарства [2], стероиди [3] и колхицини [4], докато инхибиторите на ксантиноксидазата (XOD) като алопуринол се използват за намаляване на високите нива на пикочна киселина в кръвта [5] ]. Няколко японски храни имат високо съдържание на пуринови основи, като нори (водорасли), шийтаке (гъби), пилешки дробчета и скариди от сакура [6]. Японците обаче са склонни да са по-наясно с съдържанието на пуринова основа в бирата и алкохолните напитки, въпреки че е по-ниско, отколкото в споменатите по-горе храни [7]. Приблизително 30% от японските мъже имат хиперурикемия, а 0,8% от амбулаторните пациенти са на лечение за подагра [8].

Материали и методи

Субекти

За проучването с една доза са наети 39 мъже служители на Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd. на възраст от 22 до 71 години. След като получиха пълно обяснение за целта на изследването и протокола, кандидат-субектите се съгласиха на скринингов тест, който включваше прием на тестово хранене с високо съдържание на пурини. Динатриев 5'-гуанилат (1.62 g, Cheil Jedang Indonesia PT) и натриев 5'-изозиат (1.63 g, Ajinomoto, Япония) се смесват с предлаганата на пазара прахообразна супа от царевица (17.6 g, супа Knoll cup, Ajinomoto, Япония). След това се добавят 180 ml гореща вода за разтваряне на сместа и тя се използва като тестово хранене с високо съдържание на пурини. Кандидат-субектите са гладували от 22:00 вечерта в нощта преди теста и е взета кръвна проба сутринта на теста. След това те погълнаха тестовото хранене и кръвните проби бяха събрани след 60 минути, 120 минути и 240 минути. Субектите са били включени, ако нивото на пикочната киселина на гладно е 5,5 до 8,0 mg/dL и е потвърдено повишаване на серумната пикочна киселина след поглъщане на тестовото хранене. Избрани са 20 субекта и те са на възраст от 22 до 70 години.

За проучването с повторно приложение на LCE бяха наети здрави мъже на възраст 20 години или повече сред служителите на Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd., които свободно дадоха съгласие за проучването. Сред тях за кандидати бяха избрани 39 мъже на възраст от 22 до 71 години (42,8 ± 13,3) години, които не отговарят на нито един от „критериите за изключване“ по-долу. След потвърждение на информираното съгласие се събира кръв на гладно, за да се измери изходната стойност на серумната пикочна киселина и след това се избират 30 участници, от най-високото до най-ниското ниво на пикочна киселина. Субектите са групирани така, че средната възраст да е сходна във всяка група. Нивата на пикочната киселина варират от 4,5 до 7,8 mg/dL (6,0 ± 0,9 mg/dL). Критериите за изключване бяха следните.

Настоящи лекарства за всеки хроничен симптом.
Тежка алергия към храни или лекарства.
Текущо лечение на хиперурикемия или подагра.

Подготовка и разпределяне на проби за изпитване

LCE се получава чрез водна етанолова екстракция от цветята на Chrysanthemum indicum, култивирани в Китай и на прах от Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd. LCE (търговско наименование: Kiku Flower Extract-P; Lot. T-519) съдържа 10% лутеолин, и 100 mg LCE се поставят в цветни твърди капсули за поглъщане. Бяха направени и плацебо капсули със същия външен вид като LCE капсулите, които съдържаха 100 mg декстрин. Капсулите бяха оцветени и пълнежът не се виждаше отвън. Листът за разпределение, посочващ разпределението на тестовата проба, беше строго защитен от контролер, който не участва пряко в изследването.

За проучването с единична доза 20-те субекта са разпределени в 2 групи, така че средната възраст и нивото на пикочната киселина са сходни. За проучването с многократно приложение 30-те субекта са разпределени в 2 групи от най-високата до най-ниската стойност на пикочната киселина.

Протокол

Проучванията и статистическият анализ са извършени в Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd. Проучванията са направени като плацебо-контролирани двойно-слепи кръстосани проучвания. Основният резултат е нивото на серумната пикочна киселина в двете проучвания.

За еднодозовото проучване (проведено на 8 юли 2016 г.), една група (n = 10) поглъща плацебо капсула, а другата група LCE капсула (n = 10). Всички субекти гладуват от 22:00 ч. В нощта преди теста и първото вземане на кръв се извършва сутринта на тестовия ден. След това субектите погълнаха тестовото хранене с високо съдържание на пурин и второто, третото и четвъртото вземане на кръв бяха извършени след 60, 120, 180 и 240 минути. Урината се събира 2 часа след приемане на тестовото хранене. На седем дни след първия преглед се повтаря същия тест. Субектите от всяка група поглъщат другия тип капсула и тестовото хранене и кръвта се събира по начин, подобен на описания по-горе.

За проучването с многократно приложение, кръвта и урината бяха събрани от гладуващи пациенти и в двете групи на 6 септември 2016 г. Субектите от всяка група (N = 15) поглъщаха по една плацебо капсула или една LCE капсула дневно с вода след хранене в продължение на 4 седмици. След това се вземат проби от кръв и урина от субекти на гладно. След 13-дневен период на измиване, проби от кръв и урина бяха събрани отново на гладно. След това субектите от всяка група поглъщат другия тип капсула (LCE или плацебо) в продължение на 4 седмици, след което проби от кръв и урина се събират при гладуване.

Анализ на кръв и урина

В еднодозовото проучване, събраните кръвни проби се центрофугират, за да се получи серум. Нивата на пикочната киселина в серума и урината са определени от FALCO Biosystems Ltd. (Киото, Япония).

В проучването с многократно приложение е получен серум за определяне на пикочна киселина и С-реактивен протеин (CRP), докато пълна кръв е използвана за измерване на скоростта на утаяване на еритроцитите и броя на белите кръвни клетки. Тези параметри бяха определени от FALCO Biosystems Ltd. pH на урината беше измерен с pH хартия в диапазона от 3,8 до 5,4 и 5,5 до 9,0.

Етика и съответствие

Това проучване беше проведено в съответствие с Декларацията на WMA от Хелзинки (64-то Общо събрание на WMA през 2013 г., Бразилия) и беше проведено в съответствие с етичните съображения. Правата на човека и безопасността на всеки субект бяха взети под внимание. Комитетът по етика на Oryza Oil & Fat Chemical е съставен от учени от Oryza Oil & Fat Chemical Co. Ltd. с докторска степен по фармация, както и от лекар и адвокат от юридическа фирма. Комитетът е свикан, за да оцени етичния характер и целесъобразността на протокола. Двете проучвания бяха изпълнени въз основа на протокола, одобрен от комисията по етика и всички съществени отклонения от протокола, изискващи разрешение от комисията. И двете проучвания са регистрирани в Медицинската информационна мрежа на университетската болница - Регистър на клиничните изпитвания (UMIN000023818 и UMIN000022823).

Разследване на нежелани събития

Извършва се оценка на нежеланите събития и се определя причинно-следствената връзка с тестваните вещества. Решението дали да продължи проучването е взето от отговорния лекар, ако е необходимо. Нежеланите събития се определят като симптоми, резултат от поглъщане на LCE, които са неприятни за субекта. Ако субект поиска да прекрати проучването, то незабавно се спира и се взема предвид, за да се предотврати неблагоприятно положение на субекта.

Критерии за изключване

Ако някое от следните събития се случи по време на проучването с многократно приложение, случаят се обсъжда на клиничната конференция и въпросният субект е изключен от анализ след преглед.

Ако субектът е закъснял, когато е участвал във всеки тест.
Ако броят на дните без прием на тествания продукт (т.е. не е достигнато определеното дневно количество за поглъщане) е по-голям от 15% от общия брой планирани дни на поглъщане.
Ако имаше големи проблеми по отношение на надеждността на данните поради проблеми с тестването или други причини.
Други причини предполагат, че е уместно да се изключи темата.

Статистически анализ

Резултатите се отчитат като средна стойност и SD (с изключение на параметрите на урината). Използва се двустранен сдвоен t-тест за сравнение между преди и след поглъщане на капсули. Несдвоеният t-тест беше използван за сравняване на плацебо групата с LCE групите. Вероятността по-малка от 5% се счита за значима.

Резултати

Проучване с една доза

Резултатите от тестовете, проведени преди и след периода на измиване, бяха комбинирани (общо 20 субекта). Серумното ниво на пикочна киселина преди поглъщане на плацебо или LCE капсулите е съответно 6,8 ± 1,0 mg/dL и 6,6 ± 1,0 mg/dL. На 2 часа след поглъщането на тестовото хранене, серумната пикочна киселина се повишава до 9,1 ± 1,3 mg/dL (плацебо) и 9,0 ± 1,3 mg/dL (LCE). Пикочната киселина остава над 8,5 mg/dL на 4 часа след тестовото хранене. Площта под кривата концентрация спрямо време (AUC) е почти еднаква и в двете групи, като е 457 ± 179 mg/dL · 4 часа в групата на плацебо и 469 ± 201 mg/dL · 4 часа в групата на LCE. Фигура 1А показва увеличението на серумната пикочна киселина при всички пациенти и при пациенти с ниво на пикочна киселина по-малко от 7,0 mg/dL. Няма значителни разлики до 4 часа след тестовото хранене. Екскрецията на пикочна киселина с урината е сходна и в двете групи (Фигура 1В).

Фигура 1. Промяна на серумната пикочна киселина след еднократна перорална доза LCE при субекти, получаващи тестово хранене с високо съдържание на пурин.

Четириседмично проучване с многократно приложение

По време на периода на обучение двама субекти отпаднаха от всяка от плацебо и LCE групите по лични причини. Таблица 1 показва промените в серумната пикочна киселина след поглъщане на плацебо капсули или LSE капсули. Поглъщането на LSE води до значително намаляване на пикочната киселина (-0,18 mg/dL). Статистически анализ е извършен и при пациенти с ниво на пикочна киселина над 5,5 и по-малко от 7,0 mg/dL. В резултат на това се наблюдава значително намаляване на нивото на пикочната киселина в групата на LCE в сравнение с групата на плацебо. Промените в кръвното налягане, честотата на пулса и рН на урината (параметри за оценка на безопасността) са посочени в таблица 2. Всички стойности са в нормалните граници и не са открити значителни разлики между преди и след поглъщане или между двете групи. Освен това възпалителните параметри (CRP, скоростта на утаяване на еритроцитите и броя на белите кръвни клетки) не се променят по време на поглъщане на плацебо капсули или LCE капсули (Таблица 3).

маса 1. Ниво на пикочна киселина в серума преди и след поглъщане на плацебо или LCE в продължение на 4 седмици